College of Life Science


 常見問題

有關 TechComm 整體

我有比較急切的一般性問題,應該找誰洽詢? 請打 3366-9680 馬上問

我有比較嚴肅的管理問題想申訴,應該找誰? 請直接寫 e-mail 給中心主任 yichun@ntu.edu.tw 優先保密處理

TechComm 與通常熟知的『貴重儀器中心』有何不同?

我能否在 TechComm 使用配給醫學卓越研究中心的 20 萬元補助款?

我要如何申請進入 TechComm 空間?

生科院人士 能否使用?

可否借用 TechComm 的會議室?

發表論文時如何對 TechComm 誌謝?

目前 TechComm 有何成果?

可以參觀 TechComm 嗎?

繳費相關問題

有關 TC1  基因體及轉錄體

TC 有提供 RNA 抽取的代工服務嗎?

為甚麼送件前需先進行 RNA 品質檢測?

送件前如何自行判定 RNA 的品質?

有關 TC3  蛋白質體學

進行 2-DE 分析的蛋白質樣品該如何處理?

一次 2-DE 分析需要多少量的蛋白質?

預定進行 N-端定序的樣品需要如何處理?

常用於 in gel digestion 的酵素有哪些?

預定進行 MALDI-TOF ESI-MS/MS 的樣品應如何處理?

有關 TC4  免疫學工具

抗體平台目前提供那些服務?

抗原的種類與型態如何?

需準備多少抗原? 純度要求如何?

免疫前得提供抗原的相關資訊嗎?

使用者需要自行提供人力嗎?

有關 TC5  生物影像工具

影像平台目前提供人力協助的服務為何?

使用共軛焦顯微鏡之前樣品該如何處理?

什麼是螢光?

螢光顯微鏡與共軛焦顯微鏡的區別?

有關 TCX

那些時段可使用 TCX 儀器?

要如何預約使用 TCX?

TCX 如何收費?

 


(1) TC 有提供 RNA 抽取的代工服務嗎? [Back]

 Ans  RNA 的抽取方式 ,會依照生物材料之情況而有差別,歡迎多與技術員討論,提供技術上的諮詢協助,但無法直接代工。


(2) 為甚麼送件前需先進行 RNA 品質檢測? [Back]

 Ans  因為 RNA 的品質會影響後續 microarray 結果的準確度,若 RNA 品質不佳,結果的可信度是會令人存疑的,而送件樣品 RNA 的品質及要求請盡量符合 注意事項


(3) 送件前如何自行判定 RNA 的品質? [Back]

 Ans  RNA 的品質大致可分為純度及完整度:

純度 (purity): 使用分光光度計所測得的 A260/A280 之吸光值比值。其中,A260 為核酸濃度計算的依據, 而 A280 則是代表蛋白質吸光度。 一個純度高的 RNA 其比值應在 1.9~2.1 之間。

完整度 (integrity):目前可利用電泳分析法或 Agilent 2100 Bioanalyzer 進行檢測。 其中,將 total RNA 進行 0.8% denaturing agarose gel 電泳分析中所得到的結果如下圖所示:

(a) 品質良好的 RNA 可觀察到分別由 18S 及 28S (真核生物) 所構成的兩清晰條帶,其亮度的比值:28S/18S 應接近 2。

(b) RNA 因 RNase 分解或其他因素產生降解,則會出現模糊以及 28S/18S 比值過低的情況。


(4) 那些時段可使用 TCX 儀器? [Back]

 Ans  非國定例假日 8:30~12:00 下午 13:30~17:00。


(5) 要如何預約使用 TCX 儀器? [Back]

 Ans  請撥 3366-9680 湯凱鈞先生。登記時段有重疊時,依照使用者來電順序排定。


(6) TCX 如何收費? 非生科院人士能否使用? [Back]

 Ans  TCX 收費方案尚在研議中,目前仍未正式收費,但使用者將依使用次數,依照比例分擔維修 (或合約) 費用。

TechComm 所有服務,原則上僅供本院師生使用,但目前已經逐步開放給校內同仁使用。 (未來規劃)


(7) 抗體平台目前提供那些服務? [Back]

 Ans  目前本平台提供:(1) 小白鼠傳統抗血清、(2) 大白兔傳統抗血清 、(3) 雞 IgY 免疫球蛋白、(4) 單株抗體四項服務。若需要製備蛋白質體抗體庫,因工程浩大,需要特別提出申請。


(8) 抗原的種類與型態如何? [Back]

 Ans  本平台接受的抗原種類有:(1) 純化蛋白質、(2) 表現蛋白質、(3) 已接上 carrier 或以 MAPs 方式合成之 peptides、(4) 已接上 carrier 的小分子。一般抗原都以溶液形式,但也接受由電泳膠體上切下來,或轉印到轉印膜的抗原。


(9) 需準備多少抗原? 純度要求如何? [Back]

 Ans  免疫注射每隻小鼠每次需 50~100 mg 抗原,視狀況需注射 5~8 次,每次 3~5 隻,因此委託者至少須提供 3~5 mg 抗原。

抗原純度越高越好,委託者需自行純化,本平台或  TC3 可提供協助。本平台以蛋白質電泳評估抗原純度,蛋白質越純越好,最好是單一色帶 (尤其是製備傳統抗血清者)。


(10) 免疫前得提供有關抗原的資訊嗎? [Back]

 Ans  抗原的品質是抗體製備的關鍵,為增加成功率,委託者須提供以下資訊:

1. 抗原純化的流程,以評估是否含高鹽 (NaCl) 或對生物致命的成分 (如 sodium azide)。

2. 表現蛋白質的生物來源,避免與免疫動物之親緣關係太過相近。

3. 合成 peptides 之序列請自行設計 (本平台可提供諮詢),純度必須以 HPLC 分析確認。


(11) 使用者需要自行提供人力嗎? [Back]

 Ans  使用者可自行提供協助人力,進行免疫注射及抗體篩選之 ELISA 工作,我們可安排操作訓練。細胞培養相關操作,因顧及污染控管,除非熟悉無菌操作並獲平台主持人認可,目前皆不得進入操作,只能由本平台技術人員操作。若想學習單株抗體製備技術,可選修相關課程 (免疫學技術)。使用者能否自行操作,將由本實驗室主持人判定。


(12) 可否借用 TechComm 的會議室? [Back]

 Ans  TechComm 會議室除供中心行政會議、舉辦學術研討會、講習會之外,也歡迎經由本院國際交流中心接待外賓,詳細規則請見管理規則 [TC003] 並與中心人員接洽。然而對各研究室的例行實驗進度報告,學生書報討論等活動,則恕不出借。


(13) 進行 2-DE 分析的蛋白質樣品該如何處理? [Back]

 Ans  進行 2-DE 分析的蛋白質樣品,通常先以沉澱方式萃取,以除去雜質,之後再將沉澱樣品回溶。常見的沉澱方法如 acetone, TCA/acetone, phenol, phenol/chloroform/isoamyl alcohol 等。不同沉澱方法適合不同種類的蛋白質樣品,需要參考文獻或是經由實驗測試,才能決定合適之處理方式。本平台可提供討論諮詢空間,與使用者討論如何找到最適合其樣品的處理方法。


(14) 一次 2-DE 分析需要多少量的蛋白質? [Back]

 Ans  依據膠條性質、長度及染色方法不同,分別有其最適 loading (參照下表)SYPRO Ruby 染色可比照 silver staining。然而蛋白質樣品在沉澱萃取的過程中,一定會有損失,必須將此損失量估計在內。

2-D Electrophoresis, Principles and Methods , Tom Berkelman and Tirra Stenstedt


(15) 預定進行 N-端定序的樣品需要如何處理? [Back]

 Ans  請參考 TC3-A40 使用注意事項


(16) 預定進行 MALDI-TOF ESI-MS/MS 的樣品應如何處理? [Back]

 Ans  樣本的準備方法:

1. 本平台可提供 in gel digestion 操作 。

2. 樣本濃度越高越好,Coomassie Blue 染色能清楚看到的色點,結果會較明確。然而 SYPRO Ruby 染色能清楚看到的色點,蛋白質量低,故較不易有明顯的結果。

3. 最好的樣本是 2-DE 上的單一色點,若是使用一次元電泳,就要小心避免污染,電泳前儘量以各種色層分析法預先純化,以確保蛋白質之純度。

4. 本平台目前 MALDI-TOF 或 ESI-MS/MS 均委託廠商代為操作,而經 TechComm 送出之樣品可獲優惠價格。


(17) TechComm 與通常熟知的『貴重儀器中心』有何不同? [Back]

 Ans  是有點不一樣。通常儀器中心只提供單點的儀器服務,譬如說使用某種分析儀器;但是 TC 除了提供如此的儀器之外,也關心使用者整個研究的上中下游相關實驗,希望能夠提供一個全面性的流程 (技術平台概念),而不只是單點服務,這可由各平台網頁上的『服務流程』看出來。雖然各平台不一定完全設備有理想中的所有儀器,但平台技術人員會盡力協助使用者完成整個流程實驗,甚至介紹到別的儀器中心,或者可靠的商業服務


(18) 影像平台目前提供人力協助的服務為何? [Back]

 Ans  因本平台儀器種類繁多但人力有限,技術人員無法每項儀器皆幫忙操作,目前主要在使用兩台共軛焦顯微鏡,以及兩台電子顯微鏡時提供人員服務;其餘使用樣品前處理儀器者,希望有曾使用過或修習過相關課程,可以自行操作者為佳。本平台備有標準操作流程 (standard operation process, SOP),且技術人員依然會提供協助及簡單示範,有任何疑慮可電 (02) 3366-2498 洽詢。 


(19) 使用共軛焦顯微鏡之前樣品該如何處理? [Back]

 Ans  

螢光染色或自發螢光

共軛焦顯微鏡主要是用來觀察螢光樣品,故無論使用何種材料,皆須讓其帶有螢光。可用化學染色或免疫染色的方式接上螢光物質,基因轉植讓生物細胞自製螢光,或本身用雷射激發就會有自發螢光的材料皆可。

玻片製作

原則上最容易觀察的方式是將材料製作成玻片,用 0.17 mm 厚度的蓋玻片蓋上並且仔細封片。太厚的樣品要考慮雷射的穿透能力,請先行使用切片機或徒手切薄,以利觀察。若為特殊材料或活體樣品無法封片,請先來電洽詢 (02) 3366-2498。

初步觀察

我們強烈建議使用者在預約使用共軛焦顯微鏡之前,先行使用一般螢光顯微鏡檢查樣品是否會發螢光。並請記得樣品的大小 (或使用的物鏡倍率),以及螢光物質的激發光波長 (excitation) 和發射光波長範圍 (emission),告知技術人員以便操作。  


(20) 什麼是螢光? [Back]

 Ans  當某種物質經由特定波長的入射光照射,吸收光能達到激發狀態 (excited states),在失去少許的能量之後,發散出比入射光波長更長的發射光,具有此種性質的發射光就稱之為螢光。 


(21) 螢光顯微鏡與共軛焦顯微鏡的區別? [Back]

 Ans  最主要的差異,在於共軛焦顯微鏡在發射螢光的焦點上,放置一個針孔 (pinhole),後面是一個接受光訊號的光電倍增管 (photomultiplier tube, PMT),因此任何在樣品對焦平面以外的螢光,會被針孔擋住,不會出現在畫面裡。其意義是可以得到樣品連續對焦平面的光學切片,組合成 3D 立體結構,加上其他光學路徑的改善,影像更加清晰。詳細原理請參考 美嘉儀器公司共軛焦顯微鏡 以及 How does a confocal microscope work? 


(22) 常用於 in gel digestion 的酵素有哪些? [Back]

 Ans   常用的酵素包括 trypsin, V8, Lys-C 等,可依據蛋白質上酵素切點多寡,選擇適合的酵素。如果遇到分子量較大的蛋白質,可以同時使用兩種以上酵素進行 digestion。

name

cleave

can't cut

N- or C- terminal side

Trypsin

K, R

P

C-Terminal

V8-DE (Endoproteinase Glu-C)

B(1), D, E, Z (2)

P

C-Terminal

V8-E

E, Z

P

C-Terminal

Lys-C (Endoproteinase Lys-C)

K

P

C-Terminal

Tryp-CNBr

K, R, M

P

C-Terminal

Arg-C

R

P

C-Terminal

Asp-N

B(1), D

 

N-Terminal

Asp-N ambic

D, E

 

N-Terminal

Chymotrypsin

F, Y, W, L

P

C-Terminal

CNBr

M

 

C-Terminal

Formic acid

D

 

C-Terminal

Lys-C/P

K

 

C-Terminal

Pepsin A

F, L

 

C-Terminal

TrypChymo

F, Y, W, L, K, R

P

C-Terminal

Trypsin/P

K, R

 

C-Terminal

Note

(1) B: Asx aspartic acid or asparagine

(2) Z: Glx glutamic acid or glutamine (or substances such as 4-carboxyglutamic acid and 5-oxoproline that yield glutamic acid on acid hydrolysis of peptides)

Source: http://www.matrixscience.com/help/search_field_help.html


(23) 可以參觀 TechComm 嗎? [Back]

 Ans  非常歡迎各實驗室組隊參觀 TechComm,請連絡 TC Manager (3366 9680)。

時間︰全程大約 1 hr,最好在一週前預約,緊急安排要看是否有其他活動衝突

人數︰最多 12 人 (勉強可到 15 人),最少 6 人,歡迎各實驗室組團參加。外賓參觀不在此限 (英文簡報請預先告知)

行程︰歡迎 (5 min) - 簡報 (10 min) - 參觀四樓生物影像 (15 min) - 參觀 TC 本部 (15 min) - 護照及自由討論  (10 min)

            (簡短版 30 min 行程只包含上面 underlined 部份節目)


(24) 我有繳費單據的問題,要聯絡誰? [Back]

 Ans  請撥 3366-9680,找湯凱鈞。


(25) 是否有計畫無法用臺大開立的收據核銷? [Back]

 Ans  若是計畫內有編列儀器使用費,應都可核銷。


(26) 不方便繳交現金的話,還有哪些付款方式? [Back]

 Ans  (1) 繳交即期支票,抬頭為 「國立臺灣大學」,收據上將備註票號。
        
(2) 本校人員可向出納組借款:請先確認您的計畫仍有經費可核銷,來電聯絡後續事宜。
               注意!領取收據後兩週內需完成報帳核銷。


(27) 金額超過一萬元時,TechComm 能提供估價單嗎? [Back]

 Ans  會計室審核組認定繳費明細即可代替估價單,但仍可製發估價單。


(28) 若非用本校的經費付款,可否提供 「國立臺灣大學」 以外的繳款人抬頭? [Back]

 Ans  可以,但請務必向您的計畫主持人或付款人確認後,於繳款前先與 TechComm 聯絡,確認收據抬頭及統一編號。


(29) 使用線上繳費系統時,收費帳戶名稱及繳費 ID 要如何選定? [Back]

 Ans  收費帳戶名稱選擇 961637 生命科學院科技共同空間」,繳費 ID 預設為您實驗室的電話號碼。


(30) 要帶哪些文件來領取收據? [Back]

 Ans  繳費單收執聯、身份證明文件 (學生證或助理證)


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空間規劃

使用流程

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2013/01/02

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